ПЦР в реальном времени основана на измерении интенсивности сигнала от флуоресцентного репортерного красителя во время амплификации. Интенсивность сигнала пропорциональна количеству накопленного продукта ПЦР. Флуоресцентный сигнал в каждом образце измеряется на каждом цикле амплификации. Циклическое изменение температуры реакции, сроки детекции флуоресцентного сигнала, а также обработка полученных данных контролируются программным обеспечением. Для получения правильных результатов ПЦР в реальном времени необходимо определить тот этап реакции, когда амплификация находится в экспоненциальной фазе и в компонентах реакции нет недостатка. Это необходимые условия для точного расчета числа копий ДНК-мишени в исходном образце на основании флуоресцентных данных, полученных во время реакции.
ПЦР в реальном времени позволяет автоматизировать трудоемкие процессы амплификации, детекции и анализа флуоресцентных данных. Количественный результат теста доступен сразу по окончании амплификации; дополнительные этапы анализа не требуются. Основные преимущества – это широкий линейный диапазон количественного анализа, высокая аналитическая чувствительность, высокая точность, быстрота получения результата.
Поскольку отсутствует необходимость в каких-либо манипуляциях после завершения ПЦР, риск контаминации сводится к минимуму. Это преимущество делает ПЦР в реальном времени особенно ценным инструментом для практической диагностики. ПЦР-системы Roche Diagnostics используют технологию ПЦР в реальном времени.
