User Profile
Select your user profile

cobas® MTB-RIF/INH

Tests rapides de détection de la résistance pour la détermination du traitement

La tuberculose est une infection bactérienne causée par des espèces mycobactériennes appartenant au Mycobacterium tuberculosis (TB, MTB). Une souche bactérienne est dite résistante lorsqu’elle présente une résistance à au moins un médicament primaire utilisé pour traiter la tuberculose. Une tuberculose multirésistante (MDR-TB) est une tuberculose résistante contre laquelle l’isoniazide et la rifampicine, les deux antituberculeux les plus puissants, ne sont pas efficaces. La tuberculose ultrarésistante (XDR-TB), est résistante à l’isoniazide et à la rifampicine ainsi qu’à n’importe quelle fluoroquinolone et à au moins un des trois antituberculeux injectables de deuxième intention (amikacine, capréomycine ou kanamycine). En 2017, on estimait que plus de 5 % des nouveaux cas de tuberculose dans le monde étaient des cas de MDR/XDR-TB. La fréquence de la TB-MR varie selon les régions et est plus élevée chez les patients déjà traités.

 

Le test cobas® MTB-RIF/INH destiné à être utilisé sur les systèmes cobas® 5800/6800/8800 est un test PCR en temps réel, conçu comme un test réflexe conjointement avec le test cobas® MTB. Il permet la détection qualitative et entièrement automatisée des mutations du gène rpoB associées à la résistance à la rifampicine et des mutations des gènes katG et inhA , associées à la résistance à l'isoniazide, de M. tuberculosis. Le test est destiné à être utilisé sur des échantillons

  • de frottis positifs ou négatifs pour le bacille acido-résistant
  • des échantillons d'expectorations brutes
  • d'expectorations digérées et décontaminées (N-acétyl-L-cystéine / traitées au NaOH)
  • de lavage broncho-alvéolaire (LBA) 

ayant été testés positifs pour le complexe M. tuberculosis par le test cobas® MTB. La détection de l’ADN du complexe de Mycobacterium tuberculosis de type sauvage sert de contrôle interne pour surveiller l'ensemble du processus de préparation des échantillons et d'amplification par PCR. Le test utilise un contrôle positif et un contrôle négatif à faible concentration.

MTB-RIF-INH-one-third

Algorithme de diagnostic moléculaire

Il est essentiel d’exécuter un diagnostic complet avant l'instauration du traitement. Le test cobas® MTB est effectué lorsque le patient présente des symptômes de la tuberculose. En cas de résultat positif, le patient doit subir un test de résistance aux médicaments à l'aide du cobas® MTB-RIF/INH. En cas de résultat négatif, le test cobas® MAI peut être utilisé pour diagnostiquer une infection non tuberculeuse.

Algorithme de diagnostic moléculaire

Performance clinique

MTB-RIF-INH-sensibilité-et-spécificité

Résistance hétérogène

 

La capacité à détecter la souche MTB mutante dans une infection mixte contenant la souche MTB sauvage a été confirmée par l'analyse de différents ratios mutants/type sauvage. De faibles niveaux de concentration de l'isolat de culture de MTB MDR (~3 x LoD) dans un fond pouvant atteindre 60% de MTB de type sauvage sont détectés par le test cobas® MTB-RIF/INHMTB-RIF/INH à partir d’échantillons d'expectorations et de sédiments.

Références

 

  1. Global tuberculosis report 2018. Genève : Organisation mondiale de la santé; 2018. Licence : CC BY-NC-SA 3.0 IGO.
  2. http://www.stoptb.org/events/world_tb_day/2019/assets/docs/PSC%2World%20TB%20Day%20 statement%202019_FINAL.pdf. Accessed March 2023.

Spécifications et performances analytiques

  • Volume d'échantillon

    Expectoration ≥ 0,4 ml, Sédiments ≥ 0,2 ml

  • Types d’échantillons

    Expectorations brutes, sédiments d'expectorations, lavage broncho-alvéolaire

  • Prélèvement

    À condition qu'un échantillon de taille suffisante ait été collecté, le test cobas® MTB-RIF/ INH peut être effectué conjointement avec les tests cobas® MTB et cobas® MAI sans duplication de la phase préanalytique.

     

  • Traitement de l’échantillon

    La liquéfaction, la décontamination et la sonification sont effectuées manuellement et sont suivies par une amplification et une détection automatisées sur les systèmes cobas® 5800/6800/8800

     

  • Régions cibles

    Dix-huit mutations associées à la résistance à la rifampicine (gène rpoB ) et sept mutations associées à la résistance à l'isoniazide (gène katG et promoteur du gène inhA ) sont détectées par des amorces multiples et des sondes spécifiques.

     

  • Contrôles

    Le contrôle interne garantit la validité de l'échantillon. Le contrôle positif du test et le contrôle négatif du tampon assurent la validité du test.

  • Inclusivité

    Les mutations du gène rpoB associées à la résistance à la rifampicine :

    L511P, Q513K, Q513L, Q513P, D516V, D516Y, S522L, S522Q, H526D, H526L, H526N, H526R, H526Y, S531L, S531W, L533P

     

    Les mutations du gène katG et les mutations dans le promoteur du gène inhA associées à la résistance à l’isoniazide :

    gène katG : S315I, S315N, S315T, S315T2

    promoteur du gène inhA : T-8A, T-8C, C-15T

     

    L'inclusivité de deux autres mutations du gène rpoB associées à la résistance à la rifampicine (S522W et D516G) a été vérifiée en testant les plasmides

  • Spécificité analytique

    Un panel de 145 bactéries, champignons et virus, y compris ceux que l'on retrouve habituellement dans les voies respiratoires, n'a pas perturbé le test en générant de faux positifs

     

  • Sensibilité analytique (Limite de détection)

    Résistance à RIF M. tuberculosis
    94,0 CFU/mL (sédiments d'expectorations/lavage bronchoalvéolaire)
    182 CFU/mL (expectorations brutes)

     

    Résistance à INH M. tuberculosis
    12,6 CFU/mL (sédiments d'expectorations/lavage bronchoalvéolaire)
    27,5 CFU/mL (expectorations brutes)

  • Interférence endogène

    Non affecté par la présence des niveaux élevés de suc gastrique, d'hémoglobine, de sang total humain, d'ADN humain, de mucine, de pus et de salive

  • Interférence exogène

    Non affecté par la présence de 48 médicaments sur ordonnance et en vente libre