Puesto que los ensayos de PCR multiplexado se realizan de forma simultánea en la misma muestra, ofrecen mayor rendimiento y menos procesamiento, lo que mejora la rentabilidad general.
Ensayos de PCR multiplexados:
Por tanto, en general el multiplexado parece una opción lógica. La realización de múltiples análisis en una muestra debe ser más eficaz que los ensayos de plexación única repetida, lo que ahorra a los laboratorios tiempo y dinero. Pero la respuesta es más compleja.
La PCR multiplexada puede presentar retos de optimización. En primer lugar, no todas las combinaciones de pruebas pueden realizarse juntas sin comprometer el rendimiento y la exactitud. Cada par de cebador y sonda de la prueba está diseñado para amplificar y detectar un único objetivo; cuantos más cebadores haya en una sola reacción, más probabilidad tienes de ver amplificaciones fuera del objetivo en los resultados. Tener numerosos ensayos en un pocillo también puede dar lugar a reacciones de PCR que compiten entre sí, lo que podría significar resultados falso negativos.
Es esto por lo que se precisa primero optimización de los ensayos para garantizar la exactitud de una prueba multiplexada. Los laboratorios también comparan las condiciones multiplexadas con cada reacción individual para verificar el rendimiento. La verificación del rendimiento incluye la evaluación y la optimización de los cebadores y las sondas, los aditivos y las condiciones de ciclado. Esto contribuye a identificar la combinación adecuada de las condiciones y los ingredientes que alcanzan los mismos niveles de eficacia como una reacción con plexación única correspondiente. Sin embargo, este proceso puede requerir tiempo y ser costoso.
¿Cómo pueden los laboratorios mejorar sus resultados y su eficacia operativa? La respuesta reside en una mezcla maestra multiplexada optimizada.
Una mezcla maestra multiplexada es una solución cómoda lista para usar que incluye concentraciones preoptimizadas de tampones, ADN polimerasa, dNTP y aditivos que pueden contribuir a la amplificación y la identificación de múltiples objetivos de ácidos nucleicos.
Idealmente, puesto que las reacciones se configuran a menudo a temperatura ambiente, la mezcla maestra debe tener enzimas termoestables.
Los proveedores analizan de forma repetida y optimizan una mezcla maestra multiplexada para garantizar que las reacciones multiplexadas tengan una especificidad y sensibilidad comparables con las de las pruebas de plexación única correspondientes. Esta mezcla debe permitir de forma continua la detección de objetivos de una gran variedad de materiales de muestra.
El uso de una mezcla maestra multiplexada puede reducir los costes de laboratorio al:
Los ensayos multiplexados pueden facilitar el flujo de trabajo y simplificar el manejo para la mejora de la eficacia y el control de los costes. El uso de mezclas maestras optimizadas en análisis multiplexados puede proporcionar precisión, sensibilidad y especificidad comparables con los análisis de plexación única, lo que minimiza la optimización de los ensayos que consumen tiempo. Esto puede ayudar a los laboratorios a mejorar la eficacia operativa, reducir los costes generales y mejorar las perspectivas económicas.
