For in vitro diagnostic use. Others cobas PIK3CA Mutation Test IVD IVD cobas® PIK3CA Mutation Test RMD-4800-PIK3CA-002 07 003 986 190 7 003 986 190 07003986190 7003986190 07003986190 KIT COBAS 4800 PIK3CA AMP/DET 24T IVD cobas PIK3CA Mutation Test 00875197004403 Reagents, kits 1 kit 24 tests true The cobas® PIK3CA Mutation Test is a real-time PCR test for the qualitative detection and identification of 17 mutations in exons 2, 5, 8, 10 and 21 in the gene encoding the catalytic subunit of phosphoinositide 3-kinase (PIK3CA) in DNA isolated from formalin-fixed paraffin-embedded tumor tissue (FFPET). The cobas® PIK3CA Mutation Test is a real-time PCR test for use on the cobas® 4800 System intended to be used to identify patients with metastatic breast cancer whose tumors harbor these mutations. en The cobas PIK3CA Test is based on two major processes: (1) manual sample preparation to obtain genomic DNA from FFPET; and (2) PCR amplification and detection of target DNA using complementary primer pairs and oligonucleotide probes labeled with fluorescent dyes. The test is designed to detect R88Q in exon 2, N345K in exon 5, C420R in exon 8, E542K, E545X (E545A, E545D*, E545G, and E545K), Q546X (Q546E, Q546K, Q546L, and Q546R) in exon 10, and M1043I**, H1047X (H1047L, H1047R, and H1047Y), and G1049R in exon 21. Mutation detection is achieved through PCR analysis with the cobas z 480 analyzer. A mutant control and a negative control are included in each run to confirm the validity of the run. * For the E545D amino acid change, only the nucleotide change c.1635G>T mutation is detected by the test. **For the M1043I amino acid change, only the nucleotide change c.3129G>T mutation is detected by the test. Reference sequences Please refer to the following source for the reference sequence for PIK3CA.13 PIK3CA: LRG_310t1 Sample preparation FFPET specimens are processed and genomic DNA isolated using the cobas® DNA Sample Preparation Kit, a generic manual sample preparation based on nucleic acid binding to glass fibers. A deparaffinized 5-μm section of an FFPET sample is lysed by incubation at an elevated temperature with a protease and chaotropic lysis/binding buffer that releases nucleic acids and protects the released genomic DNA from DNases. Subsequently, isopropanol is added to the lysis mixture that is then centrifuged through a column with a glass fiber filter insert. During centrifugation, the genomic DNA is bound to the surface of the glass fiber filter. Unbound substances, such as salts, proteins and other cellular impurities, are removed by centrifugation. The adsorbed nucleic acids are washed and then eluted with an aqueous solution. The amount of genomic DNA is spectrophotometrically determined and adjusted to a fixed concentration to be added to the amplification/detection mixture. The target DNA is then amplified and detected on the cobas z 480 analyzer using the amplification and detection reagents provided in the cobas PIK3CA Test kit. PCR amplification Target selection The cobas PIK3CA Test kit uses a pool of primers that define specific base-pair sequences that range from 85 to 155 base pairs long in PIK3CA exons 2, 5, 8, 10, and 21. An additional primer pair targets a conserved 167 base pair region in exon 4 of the PIK3CA gene to provide a full process control for sample adequacy, extraction and amplification. Amplification occurs only in the regions of the PIK3CA gene between the primers; the entire PIK3CA gene is not amplified. Target amplification A derivative of Thermus species Z05-AS1 DNA polymerase is utilized for target amplification. First, the PCR reaction mixture is heated to denature the genomic DNA and expose the primer target sequences. As the mixture cools, theupstream and downstream primers anneal to the target DNA sequences. The Z05-AS1 DNA polymerase, in the presence of divalent metal ion and excess dNTP, extends each annealed primer, thus synthesizing a second DNA strand. This completes the first cycle of PCR, yielding a double-stranded DNA copy, which includes the targeted basepair regions of the PIK3CA gene. This process is repeated for a number of cycles, with each cycle effectively doubling the amount of amplicon DNA. Automated real-time mutation detection The cobas PIK3CA Test utilizes real-time PCR technology. Each target-specific, oligonucleotide probe in the reaction is labeled with a fluorescent dye that serves as a reporter, and with a quencher molecule that absorbs (quenches) fluorescent emissions from the reporter dye within an intact probe. During each cycle of amplification, a probe complementary to the single-stranded DNA sequence in the amplicon binds and is subsequently cleaved by the 5' to 3' nuclease activity of the Z05-AS1 DNA Polymerase. Once the reporter dye is separated from the quencher by this nuclease activity, fluorescence of a characteristic wavelength can be measured when the reporter dye is excited by the appropriate spectrum of light. Four different reporter dyes are used to detect the PIK3CA sequences targeted by the test. Amplification of the targeted PIK3CA sequences are detected independently across three reactions by measuring fluorescence at the four characteristic wavelengths in dedicated optical channels. Selective amplification Selective amplification of target nucleic acid from the sample is achieved in the cobas PIK3CA Test by the use of AmpErase (uracil-N-glycosylase) enzyme and deoxyuridine triphosphate (dUTP).14 The AmpErase enzyme recognizes and catalyzes the destruction of DNA strands containing deoxyuridine but not DNA containing thymidine. Deoxyuridine is not present in naturally occurring DNA but is always present in amplicon due to the use of dUTP in addition to deoxythymidine triphosphate as one of the nucleotide triphosphates in the Master Mix reagents; therefore, only amplicon contains deoxyuridine. Deoxyuridine renders contaminating amplicon susceptible to destruction by AmpErase enzyme prior to amplification of the target DNA. The AmpErase enzyme, which is included in the Master Mix reagents, catalyzes the cleavage of deoxyuridine-containing DNA at the deoxyuridine residues by opening the deoxyribose chain at the C1-position. When heated in the first thermal cycling step at alkaline pH, the amplicon DNA chain breaks at the position of the deoxyuridine, thereby rendering the DNA non-amplifiable. The AmpErase enzyme is inactive at temperatures above 55°C, i.e., throughout the thermal cycling steps, and therefore does not destroy target amplicon. 13. LRG. LRG_310 – Gene: PIK3CA. Available at: http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/lrgex/LRG_310.xml. Accessed September 3, 2020. 14. Longo MC, Berninger MS, Hartley JL. Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 1990;93:125-8. PMID: 2227421. en

cobas^{^®} PIK3CA Mutation Test

IVD

Liên hệ chúng tôi

Thông tin chung

Con đường tín hiệu phosphoinositide-3-kinase (PI3K) là nhân tố điều hòa chính cho nhiều đặc điểm sống của tế bào bình thường. ^1-3 Sự kích hoạt và rối loạn điều hòa con đường PI3K có liên quan đến một loạt các bệnh ung thư ở người. ⁴ Trong bệnh ung thư, một cơ chế quan trọng của sự kích hoạt con đường tín hiệu xảy ra thông qua các thụ thể đã được biết là thụ thể tyrosine kynase (RTK), như thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô 2 (HER-2) hoặc thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu mô (EGFR). PI3K, Akt và mTOR bao gồm 3 điểm kết nối chính trong con đường tín hiệu PI3K/Akt/ mTOR. ⁵ Sự kích hoạt con đường PI3K dẫn đến chuyển đổi phosphatidylinositol (4,5)- bisphosphate (PIP2) thành phosphatidylinositol (3,4,5)-trisphosphate (PIP3), một chất dẫn truyền thông tin thứ cấp quan trọng kích thích một loạt các con đường tác động xuôi dòng bao gồm Akt và mTOR. Sự kích hoạt con đường PI3K/Akt/mTOR dẫn đến nhiều quá trình của tế bào như tăng trưởng, tăng sinh và sống còn. ⁶

PIK3CA là một trong những gen ung thư đột biến cao nhất được xác định trong bệnh ung thư ở người

Ngoài ra, hầu hết các đột biến được báo cáo xảy ra ở một số điểm nóng trong protein (các codon 1047 [40%], 545 [25%], và 542 [13%]). ⁷ Hầu hết các đột biến xảy ra chủ yếu ở exon 10 và 21 của PIK3CA. Tuy nhiên, sự kích hoạt các đột biến được tìm thấy ở exon 2, 5 và 8. Trong cơ sở dữ liệu COSMIC , PIK3CA đã được chứng minh gây đột biến 12% trên tất cả các loại khối u. Trong ung thư vú (BC), các đột biến PIK3CA được tìm thấy trong 26% các khối u được xét nghiệm. Các đột biến PIK3CA đã được chứng minh là thường gặp hơn trong ung thư vú có thụ thể nội tiết dương tính (~40%) và thụ thể HER-2 dương tính (~25%). ^8,9

Ở phụ nữ, ung thư vú là bệnh ung thư thường gặp nhất và là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu do ung thư

Ở phụ nữ, ung thư vú là bệnh ung thư thường gặp nhất và là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu do ung thư. Năm 2017, ung thư vú chiếm 25% tổng số ca ung thư và 15% ca tử vong do ung thư ở phụ nữ trên toàn thế giới. ¹⁰ Khoảng một nửa số ca ung thư vú và 60% ca tử vong được ước tính xảy ra ở các nước kinh tế phát triển.

Nhìn chung, tỷ lệ mắc bệnh cao ở Tây và Bắc Âu, Úc/New Zealand và Bắc Mỹ. Các yếu tố góp phần vào sự khác biệt quốc tế về tỷ lệ mắc phần lớn xuất phát từ sự khác biệt về các yếu tố sinh sản và nội tiết tố và khả năng sàng lọc giúp phát hiện sớm. ¹¹ Nhiều nghiên cứu đã chứng minh rằng các đột biến PIK3CA có giá trị tiên lượng trong ung thư vú, khi bệnh nhân mang đột biến PIK3CA có thời gian sống không tiến triển bệnh và thời gian sống toàn bộ ngắn hơn đáng kể so với bệnh nhân mang PIK3CA dạng hoang dại, bất kể phương pháp điều trị được áp dụng. Do đó, việc xác định tình trạng đột biến PIK3CA đóng vai trò quan trọng trong việc xây dựng các chiến lược điều trị hiệu quả cho bệnh nhân ung thư vú. ¹²

Mục đích sử dụng

Xét nghiệm cobas^® PIK3CA Mutation là xét nghiệm real-time PCR dùng để phát hiện định tính và xác định 17 đột biến ở các exon 2, 5, 8, 10 và 21 trong gen mã hóa tiểu đơn vị xúc tác phosphoinositide 3-kinase (PIK3CA) trong DNA được phân lập từ mô khối u cố định bằng formalin vùi trong paraffin. Xét nghiệm cobas^® PIK3CA Mutation là xét nghiệm real-time PCR sử dụng trên hệ thống cobas^® 4800 để xác định bệnh nhân ung thư vú di căn có khối u mang các đột biến này.

Thông tin chung

Thông tin đặt hàng

Hệ thống xét nghiệm tương thích

Liên hệ

Nếu bạn có câu hỏi về các sản phẩm hoặc dịch vụ của chúng tôi, vui lòng điền vào biểu mẫu.
Đại diện kinh doanh của Roche sẽ liên hệ với bạn.

Tài liệu tham khảo:

Courtney KD, Corcoran RB, Engelman JA. The PI3K pathway as drug target in human cancer. J Clin Oncol. 2010;28(6):1075-83. doi:10.1200/JCO.2009.25.3641.
Katso R, Okkenhaug K, Ahmadi K, White S, Timms J, Waterfield MD. Cellular function of phosphoinositide 3 kinases: implications for development, homeostasis, and cancer. Annu Rev Cell Dev Biol. 2001;17:615-75. doi:10.1146/annurev.cellbio.17.1.615
Workman P, Clarke P. P13 Kinase in Cancer: From Biology to Clinic. ASCO 2012 Educational Book. Available at: https://ascopubs.org/doi/pdf/10.14694/EdBook_AM.2012.32.89. Accessed September 3, 2020.
Samuels Y, Diaz LA, Jr., Schmidt-Kittler O, et al. Mutant PIK3CA promotes cell growth and invasion of human cancer cells. Cancer Cell. 2005;7(6):561-73. doi:10.1016/j.ccr.2005.05.014
Vivanco I, Sawyers CL. The phosphatidylinositol 3-Kinase AKT pathway in human cancer. Nat Rev Cancer. 2002;2(7):489-501. doi:10.1038/nrc839
van der Heijden MS, Bernards R. Inhibition of the PI3K pathway: hope we can believe in? Clin Cancer Res. 2010;16(12):3094-9. doi:10.1158/1078-0432.CCR-09-3004
Jemal A, Bray F, Center MM, Ferlay J, Ward E, Forman D. Global cancer statistics. CA Cancer J Clin. 2011;61(2):69-90. doi:10.3322/caac.20107
Samuels Y, Wang Z, Bardelli A, et al. High frequency of mutations of the PIK3CA gene in human cancers. Science. 2004;304(5670):554. doi:10.1126/science.1096502
Stemke-Hale K, Gonzalez-Angulo AM, Lluch A, et al. An integrative genomic and proteomic analysis of PIK3CA, PTEN, and AKT mutations in breast cancer. Cancer Res. 2008;68(15):6084-91. doi:10.1158/0008 5472.CAN-07-6854
Fitzmaurice C, Abate D, Abbasi N, et al. Global, Regional, and National Cancer Incidence, Mortality, Years of Life Lost, Years Lived With Disability, and Disability-Adjusted Life-Years for 29 Cancer Groups, 1990 to 2017: A Systematic Analysis for the Global Burden of Disease Study. JAMA Oncol. 2019;5(12):1749-68. doi:10.1001/jamaoncol.2019.2996
Mackay J, Jemal A, Lee NC, Parkin DM. The Cancer Atlas. American Cancer Society; 2006.
Fillbrunn M, Signorovitch J, Andre F, et al. PIK3CA mutation status, progression and survival in advanced HR + /HER2- breast cancer: a meta-analysis of published clinical trials. BMC Cancer. 2022;22(1):1002. doi:10.1186/s12885-022-10078-5

Thông tin đăng ký sản phẩm:

Bộ xét nghiệm định tính các đột biến của gen mã hóa tiểu đơn vị xúc tác phosphoinositide 3-kinase PIK3CA

cobas^® PIK3CA Mutation Test

Chủ sở hữu số lưu hành:

CÔNG TY TNHH ROCHE VIỆT NAM

Tầng 27, Tòa nhà Pearl Plaza, 561A Điện Biên Phủ, Phường Thạnh Mỹ Tây, Tp. Hồ Chí Minh, Việt Nam

Mã số tài liệu: MC-VN-01699

User profile

Select your user profile

cobas^{^®} PIK3CA Mutation Test

Thông tin chung

PIK3CA là một trong những gen ung thư đột biến cao nhất được xác định trong bệnh ung thư ở người

Ở phụ nữ, ung thư vú là bệnh ung thư thường gặp nhất và là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu do ung thư

Mục đích sử dụng

Thông tin chung

Thông tin đặt hàng

Tài liệu kỹ thuật

Truy cập các tài liệu sẵn có tại quốc gia của bạn

Hệ thống xét nghiệm tương thích

Liên hệ

User profile

Select your user profile

cobas® PIK3CA Mutation Test

Thông tin chung

PIK3CA là một trong những gen ung thư đột biến cao nhất được xác định trong bệnh ung thư ở người

Ở phụ nữ, ung thư vú là bệnh ung thư thường gặp nhất và là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu do ung thư

Mục đích sử dụng

Thông tin chung

Thông tin đặt hàng

Tài liệu kỹ thuật

Truy cập các tài liệu sẵn có tại quốc gia của bạn

Hệ thống xét nghiệm tương thích

Sản phẩm liên quan

Liên hệ

cobas^{^®} PIK3CA Mutation Test